組培知識(shí) | 培養(yǎng)基配制流程和注意要點(diǎn)組培學(xué)習(xí)
導(dǎo)讀：配制培養(yǎng)基時(shí)要預(yù)先做好準(zhǔn)備，首先要依據(jù)培養(yǎng)物和培養(yǎng)目的確定其培養(yǎng)基配方；再根據(jù)培養(yǎng)材料以及實(shí)驗(yàn)處理的多少，確定其培養(yǎng)基的用量；然后準(zhǔn)備好所需的用具。
培養(yǎng)基配制程序如下：
1. 將貯存的各種母液按順序依次放好。
2. 將各種潔凈的玻璃器皿如培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、吸管、玻璃棒、漏斗等，放在指定的位置。準(zhǔn)備好蒸餾水或無(wú)離子水及瓶蓋或封口膜、包紙、橡皮筋等。
3. 稱取規(guī)定量的瓊脂和蔗糖，將瓊脂置于精鋼鍋或者電飯煲中，加水至培養(yǎng)基最終容積的3/4或1/2，隨之加熱使之溶解，注意防止煳鍋底和溢出。瓊脂必須完全溶化，以免造成濃度不均。
瓊脂不能過多，不然會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基太硬，含水太少，通氣不良；反之，培養(yǎng)基太軟，植物材料則難以固定。由于瓊脂較難溶解，所以在制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)首先加熱溶解。
4. 按母液順序，根據(jù)不同母液的濃縮倍數(shù)移取規(guī)定的量（關(guān)注組培圈微信號(hào)：zupeiquan，回復(fù)“1005”查看母液的配制方法和濃縮倍數(shù)），如配制1L MS培養(yǎng)基移取濃縮10倍的大量元素母液為100mL。母液加完后，再經(jīng)過計(jì)算加入所需要的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。
在加入母液或生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，應(yīng)事先檢查這些藥品是否已經(jīng)變色或產(chǎn)生沉淀，若出現(xiàn)這些現(xiàn)象就停止使用。加完后一并倒入已溶化的瓊脂中，并再加入蔗糖。
5. 加蒸餾水定容至培養(yǎng)基的最終容積。
6. pH值調(diào)整。培養(yǎng)基的pH值（酸堿度）直接影響培養(yǎng)物對(duì)離子的吸收，所以過酸或過堿都會(huì)影響植物的生長(zhǎng)。此外，瓊脂培養(yǎng)基的pH值還影響到其凝固程度，所以當(dāng)培養(yǎng)基配制好以后，應(yīng)隨即進(jìn)行pH值的調(diào)整（一般pH值為5.6-6.0）。
最好是用酸度計(jì)測(cè)試，即快又準(zhǔn)，如無(wú)此設(shè)備也可以用精密pH試紙（應(yīng)在干燥容器中保存，以免吸潮而失效）。若培養(yǎng)基偏酸就用1mol/L的氫氧化鈉來調(diào)節(jié)，偏堿則用1mol/L的鹽酸來調(diào)節(jié)。
經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，由于某些成分的分解（如蔗糖）或氧化，使培養(yǎng)基的pH值會(huì)降低（一般會(huì)降低0.2左右）。有時(shí)玻璃皿質(zhì)量較差，其中一部分物質(zhì)溶解，也會(huì)影響酸度的變化，這些再調(diào)整培養(yǎng)基的pH值的時(shí)候都要考慮進(jìn)去。
一般在比較成熟的情況下，會(huì)在培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌前調(diào)高一定的pH值，以便適應(yīng)滅菌后pH值下降的問題，具體調(diào)高多少可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)摸索。
7. 培養(yǎng)基的分裝。瓊脂約在40℃以下時(shí)凝固，因此配制好的培養(yǎng)基要趁熱分裝，分裝時(shí)一般用燒杯、漏斗直接精選分注。若條件允許，用培養(yǎng)基灌裝機(jī)來分注會(huì)更加方便（下期將會(huì)發(fā)布一篇自制簡(jiǎn)易灌裝機(jī)的文章，敬請(qǐng)關(guān)注）。
分裝時(shí)要掌握好分注量，多了即浪費(fèi)又減小培養(yǎng)物的生長(zhǎng)空間；少了又會(huì)因營(yíng)養(yǎng)不足而影響生長(zhǎng)，一般以占培養(yǎng)容器1/4 - 1/3左右為宜，培養(yǎng)基在培養(yǎng)容器中的厚度約為1.5cm。
分裝時(shí)要注意不要將培養(yǎng)基沾到管壁上，以免引起污染。分裝后立即塞上棉塞或者蓋上瓶蓋或封好封口膜，并在培養(yǎng)瓶上貼標(biāo)簽或用記號(hào)筆在瓶壁上作好標(biāo)注，然后進(jìn)行滅菌。
培養(yǎng)基配制流程圖如下：
